使用这些室温DNA存储解决方案释放您的冰箱

这是一个与分子生物学本身一样古老的格言:你不会将DNA存储在工作台上。DNA通常在-20°C,-80°C甚**液氮中冷冻保存,需要大量资金和经常性成本以及空间 - 更不用说冷冻机停机时的疯狂争夺。类似地,用冷却块或干冰运输冷冻DNA是昂贵的,可能需要特殊的文书工作和处理,并且如果有延迟则存在腐败的风险。

但是有一种更温暖,更简单的替代方案:用于在室温下储存和运输DNA的系统。在这里,我们探索您的选择

Guelph大学安大略省生物多样性研究所的**DNA科学家Natalia Ivanova指出,保存DNA而不冻结的一种方法是将其与某种纤维材料结合  。

例如,Whatman FTA卡采用涂层纤维素膜,DNA将缠绕在其中。起始样品可以与血液,细菌培养物或纯化的DNA一样多样化,化学涂层将溶解细胞并保护样品DNA免受核酸酶和氧化,紫外线和微生物降解。根据现在拥有Whatman的GE Healthcare Life Sciences 的  产品文献(PDF),“室温下储存在FTA卡上的基因组DNA数据显示,血液样本的DNA稳定性超过20年。”

但伊万诺娃警告称,“洗脱DNA并不容易”,需要一系列基于实验室的洗涤来清除污染物; 相反,冲头通常取自FTA卡并直接用于下游应用,例如PCR。

IntegenX的  GenPlates是每个孔中含有6mm FTA圆盘的微量滴定板; 它们具有各种配置,例如三个96孔区域,六个40阱区域和12个16阱区域。将样品加入孔中并干燥后,用粘合剂盖密封板以便储存或运输。GenPlates可与市售液体处理器一起使用,以帮助实现自动化。

其他产品,如Macherey-Nagel的NucleoCard®,可以类似地用于裂解细胞和结合DNA。

Whatman**近推出了新系列的FTA Elute卡。在这里,与DNA保持与基质结合的标准FTA卡形成对比,“FTA Elute的化学成分允许蛋白质[例如,来自裂解细胞]保持与卡片基质紧密结合,” 产品说小册子(PDF),“快速简便的洗脱步骤,包括水和热,以获得纯化的单链DNA溶液。”

玻璃

盐水虾和缓步动物等无水生物  可以通过保存其玻璃质形式的DNA和其他生物分子(基本上是收缩包裹它们)而在长达一个世纪的干旱中存活。在存在高浓度的二糖(例如海藻糖)的情况下,生物体能够通过氢键可逆地稳定这些极性分子。

海藻糖和聚合物聚乙烯醇(PVA)已成功用于法医学和其他实验室科学中的核酸冷冻保存。伊万诺娃和玛莎Kuzmina测试的这些DIY版本,和市售合成Biomatrica  DNAstable®产品,为他们的相对能力保护DNA四年[1]。他们发现DNAStable板上的存储在室温和56°C(模拟加速老化)提供了比DIY解决方案更好的保护,但所有这些都足够稳定用于运输目的。

Biomatrica的DNAStable有多种形式,包括在管中加入干燥的DNA和加入DNA的96孔和384孔板,以及液体(DNAStable LD),可以添加到客户选择的实验室器具中的样品中。将样品在层流罩下或使用真空浓缩器干燥。Biomatrica营销专家Michael Vengrow指出,不需要特殊设备来存放样品。“但是,为了谨慎起见,我们为产品提供保湿袋和一些干燥剂。”

IntegenX提供与Qiagen及其QIAsafe(2013年底停产)类似的产品GenTegra DNA。对于DNAStable和GenTegra DNA,回收仅涉及重建样品,通常在水中。补液后不需要进行净化或纯化,**成分显然不会影响下游应用,如PCR,测序和微阵列,UCSF的Eunice Wan及其同事在2009年的一份出版物中写道[2]。然而,它们确实改变了A230 / 280的比例,可能是因为产品本身优先在230nm处吸收。

Biomatrica**近推出了一种新产品DNAStable Plus,它可以使样品在使用或干燥之前稳定并以液体形式储存长达六个月,Vengrow指出。该公司还提供专为RNA配制的产品。

采样

已知冷冻/解冻循环对DNA完整性具有有害影响,并且通常鼓励研究人员通过以等分试样制备样品来**小化冻/融。

在室温下干燥存储在Whatman卡片上的DNA可以通过每次从卡上刷新来“重复使用”。类似地,可以对来自GenPlates的单个孔进行取样而不会干扰其他孔。

在化学保存的DNA的情况下,“你可以做多次水合/脱水。我们为每种协议中有多少提供了建议,“Vengrow说。以等分试样存储干燥的DNA可以缓解这个问题,但是,Ivanova警告说,稀释的样品不能承受多次水合/脱水以及更浓缩的样品。

底线

对于拥有过度拥挤的冰柜或博士后样品档案的实验室来说,室温储存系统似乎是一种受欢迎的缓解措施。但Ivanova不建议您将所有现有样品移**室温储存。数据并非完整。“对于真正的长期存储,我仍然会选择-80 [°C],”她说。但对于没有这种冰箱的实验室来说,“在干燥条件下储存DNA可以在-20°C [℃]储存时增加额外的安全性。”

参考

[1] Ivanova,NV,Kuzmina,ML,“室温下干燥DNA储存和运输的协议”,Molecular Ecology Resources,13:890-8,2013。[PubMed ID:23789643 ]

[2] Wan,E,et al。,“Green technologies for room temperature nucleic acid storage,”Curr Issues Mol Biol,12:135-42,2009。[PubMed ID:19801719 ]

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