保持细胞健康和快乐

培养细胞可能是一件棘手的事情。考虑到它们来自生物体,它们具有特定类型的需求,使它们能够在有利但人工的条件下繁殖。在他们选择的媒体中确保营养丰富和温度控制的环境是一个良好的开端。但是,如何保持健康的细胞,以便您可以执行成功的实验?

鉴于细胞培养是基础研究和药物发现和开发中使用的主要工具之一,已经为各种细胞类型生成了过程和标准化方案。细胞活力程序和表征分析可以帮助维持适合您实验的细胞。然而,细胞是生物,因此它们如何生长以及让它们快乐的变化自然会有一些变化。

以下是加州大学伯克利分校细胞培养基金会主任Alison Killilea和ATCC产品线业务经理Kevin Grady的一些有用提示,旨在根据细胞培养中出现的共同挑战保持细胞健康和快乐。

解决细胞污染问题

受污染的培养物可导致细胞减弱和死亡,或可改变影响实验结果的表达模式和转染效率。支原体对细胞培养实验室来说是一个挑战,因为感染不易察觉。可以进行基于PCR的支原体检测测定,或者必须使用核染色来观察支原体所在的细胞膜上的点状染色。所有培养物在使用前都应进行支原体检测,特别是如果从另一个实验室收到的话。

为了对抗污染,笔/链球是媒体的常见添加剂。但是,要注意不要使用抗生素,因为压力会增加细胞的选择和行为。笔/ strep还可以掩盖污染问题,使其扩散。相反,确保无菌技术首先用于防止任何污染。

无菌技术可能是任何细胞培养方案中**重要的一个方面。使用前后使用70%乙醇喷涂罩,在进入罩前喷涂手套,打开前喷洒介质瓶。诸如此类的无菌技术可在不使用压力笔/链条的情况下保持细胞快乐和无污染。

知道你的细胞

为了保持愉快的文化,请始终使用或**少从推荐的媒体开始。某些细胞类型在适合它们的特定培养基中增殖更好。然而,无论使用何种介质,某些实验条件都会使细胞受损。稀疏接种的细胞是不健康的,因为生长因子和其他激素的数量减少是由较少数量的细胞释放的。为了克服这个问题,如果需要稀疏铺板的细胞,在传代细胞时使用20%条件培养基与80%新培养基结合,以提供激素的初始嗡嗡声,使细胞在新环境中感觉舒适。

胎牛血清(FBS)是细胞培养的另一种重要生长培养基,其含有低抗体水平和更多生长因子,允许跨越不同细胞培养应用的灵活性。预测试和筛选FBS通过保持营养基质在传代中保持稳定,有助于确保健康的细胞转移。

细胞系维护

冷冻和解冻技术可以在右脚开始新细胞,或导致细胞死亡。冷冻细胞应使用相关的慢速冷却装置以每分钟一度的速度进行。这会在细胞间产生均匀的冻结并限制冰晶的形成。可靠的冷冻机将使细胞保持恒定状态,同时不会造成致命的冻融循环。

相反,解冻应在37度水浴中快速进行,然后重新悬浮在完全生长培养基中。创建标准化协议以使细胞保持**佳状态。确保精确地遵循它们,不要偏离定时程序,导致在水浴中花费太多时间,或其他有害的延迟。

环境监测

强烈建议常规的环境监测习惯来测试实验室的清洁度。在细胞培养罩中留下开放的琼脂平板,气流良好,然后孵育平板。如果罩子被正确清洁将是显而易见的。可以使用培养箱进行相同的测试,将开放的培养基瓶储存一段时间。确保使用具有良好层流的优质生物安全柜是任何细胞培养实验室维持健康细胞培养而不受外界环境影响的重要特征。

对CO 2和温度变化进行培养箱检查可以是保持细胞快乐的重要方面。如果他们的外部环境不稳定,那么他们也不会。因此,选择能够保持恒定CO 2水平和温度范围的优质培养箱可以节省时间和潜在的细胞系。

维持细胞培养需要时间,耐心和适应性技术,以便为细胞的良好生长创造合适的环境。一旦掌握,健康的细胞培养可能是成功实验的关键。

客服电话
  • 17051050460
  • 0571-58120942